Bijlage II Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria (PPE) 2007

Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria (PPE) 2007

Analysemethoden voor het aantonen van Salmonella en Camopylobacter in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Voor het aantonen van Salmonella of Campylobacter in de pluimveesector staan de volgende door de Raad voor Accreditatie geaccrediteerde en door het productschap vastgestelde branchemethoden ter beschikking. PVE-SALMONELLA-MSRV-140607 PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. PVE-SALMONELLA-SERO-140607 Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. PVE-SALMONELLA-VIDAS-140607 PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van VIDAS SLM in dons, afkomstig van pluimvee. PVE-SALMONELLA-IQ-140607 PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van iQ CheckTM real time PCR in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. PVE-CAMPYLOBACTER-140607 PVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van Preston en CCDA in mest en vlees, afkomstig van pluimvee. PVE-CAMPYLOBACTER-VIDAS-140607 PVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van VIDAS CAM in vlees, afkomstig van pluimvee. Algemene informatie alsmede bovenstaande branchemethoden zijn tevens beschikbaar via de website: www.pve.nl en kies vervolgens voor bedrijfsnet. PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Dit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van Salmonella in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. De versie van de hier beschreven PVE Branchemethode MSRV is gebaseerd op Annex D va ISO 6579. De wijzigingen in het huidige protocol ten opzichte van de vorige versie (2004) zijn samengevat in hoofdstuk 9. Salmonella: micro-organismen die de voor deze bacteriën karakteristieke groei vertonen en specifieke biochemische en serologische reacties vertonen wanneer wordt gekweekt respectievelijk getest volgens

– Pak het paar overschoentjes zorgvuldig uit om te vermijden dat aanhangend fecaal materiaal loskomt en plaats ze in 225 ml BPw (kamertemperatuur);
– Bij samenvoegen van vijf paar overschoentjes tot twee monsters: breng vijf afzonderlijke monsters in minimaal 225 ml BPw en zorg ervoor dat alle monsters volledig ondergedompeld zijn;
– Zwenk om, zodat het monster volledig verzadigd is, en volg verder de procedure vanaf 6.3.
– Breng in het laboratorium elk monster (of verzamelmonster) over in een even groot gewicht BPw en schud voorzichtig;
– Laat het monster 10-15 min zacht worden en schud voorzichtig;
– Neem onmiddellijk na het mengen 50 g van het mengsel en voeg dat bij 200 ml BPw (kamertemperatuur). Volg verder de procedure vanaf 6.3.
– Blanco controle,
– Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze negatieve controle komen te vervallen),
– Positieve controle.
– De concentratie novobiocine in het selectieve ophopingsmedium MSRV is gewijzigd in 10 mg/L (was 20 mg/L);
– De pH eis van MSRV bij kamertemperatuur is 5,2 gebleven, echter de range is 5,1 - 5,4 geworden (in plaats van 5,2 ± 0,2);
– De incubatietemperatuur van MSRV is gewijzigd in 41, 5 °C ± 1 °C (was 42 °C ± 0, 5 °C);
– Het uitplaatmedium is gewijzigd in Xylose Lysine Desoxycholaat (XLD) agar (was Briljantgroen agar: BGA). Voor het uitplaten kan worden volstaan met standaard formaat Petrischalen met XLD (ca 9 cm diameter).
– Annex D schrijft voor dat het uitplaten vanaf MSRV dient te geschieden op XLD en op een tweede selectieve agarplaat naar keuze. In de PVE branchemethode is alleen XLD als uitplaatmedium aangegeven. Dit is in lijn met de vorige versie(s) van de PVE branchemethode MSRV waarin ook slechts één uitplaatmedium werd voorgeschreven, zijnde BGA. Uit literatuur blijkt dat XLD een hoge sensitiviteit en specificiteit heeft (Cooke et al., 1999) en in sommige pluimveemonsters een hoger percentage positiviteit vertoont dan BGA (Rall et al., 2005). De belangrijkste Salmonella serotypes die bij pluimvee worden gevonden groeien op XLD (Feldsine et al., 2003), zodat verwacht mag worden dat een tweede uitplaatmedium naast XLD weinig extra informatie toevoegt.
– De biochemische bevestiging zoals beschreven in Annex D is uitgebreider dan die van de PVE branchemethode. Echter, de in de PVE branchemethode beschreven bevestigings testen zijn reeds voldoende om de meerderheid van de Salmonella verdachte kolonies op XLD als biochemisch verdacht te kenmerken. Na de biochemische bevestiging vindt ook nog een serotypering plaats wat uiteindelijk de definitieve uitslag voor Salmonella geeft.
• Cooke, V.M., R.J. Miles, R.G. Price and A.C. Richardson, 1999. A novel chromogenic ester agar medium for detection of Salmonellae. Applied and Environmental Microbiology, 1999, Vol. 65, no 2, p 807-812.
• Feldsine, P.T., Lienau, A.H., Leung, S.C., Mui, L.A., Humbert, F., Bohnert, M., Mooijman, K., Schulten, S, in ’t Veld, P., Rollier, P., Leuschner, R and Capps, K., 2003. Detection of Salmonella in fresh cheese, poultry products, and dried egg products by the ISO 6579 Salmonella culture procedure and the AOAC official method: Collaborative study. Journal of AOAC International, vol 86, no. 2, 2003, 275-295.
• Hartman, dr. E.G., 1999. Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis (MSRV) medium. Gezondheidsdienst voor dieren, GD projectnummer 401909, rapport nr. 1, september 1999.
• ISO 6579:2002 / Amendment 1:2007. Annex D: Detection of Salmonella spp. in animal faeces and in environmental samples from the primary production stage. International Standardisation Organisation, Geneva, Switzerland.
• PVE-SALMONELLA-SERO-140607. Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl
• NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Horizontale methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• Rall, V.L.M., R. Rall, L. Casale Aragon and M. Guimaraes da Silva, 2005. Evaluation of three enrichment broths and five plating media for Salmonella detection in poultry. Brazilian Journal of Microbiology, 2005, 36: 147-150.
• Verordening (EG) nr. 1003/2005 ter uitvoering van Verordening (EG) nr. 2160/2003 van het Europees Parlement en de Raad wat betreft een communautaire doelstelling voor het verminderen van de prevalentie van bepaalde serotypen Salmonella bij vermeerderingskoppels van Gallus gallus en tot wijziging van Verordening (EG) nr. 2160/2003. Publicatieblad van de Europese Unie, L 170/12, 01072005.
• Zee, van der H., E. De Boer, P. Van Netten, 1990. Salmonella isolatie met behulp van MSRV. De Ware (n) chemicus 20: 189-199.
– Los de ingrediënten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 ± 0,2 bij 25°C bedraagt;
– Verdeel het medium over daarvoor geschikte flessen of potten;
– Steriliseer in een autoclaaf ( 15 min. 121°C).
– Los de ingrediënten op in het water;
– Breng het mengsel onder voortdurend mengen aan de kook (verhit niet te lang!);
– NIET AUTOCLAVEREN;
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na verhitten 5,2 (5,1 - 5,4) bij 25 °C bedraagt;
– Koel het mengsel af tot 47 - 50 °C.
– Los 0,05 g novobiocine op in 10 ml water;
– Steriliseer de oplossing d.m.v. filtratie (filter met poriegrootte van 0,22 µm).
– Indien de oplossing niet direct wordt gebruikt kan deze opgeslagen worden bij 5 °C ± 3 °C voor maximaal 4 weken, of bij -20 °C ± 5 °C voor maximaal 1 jaar.
– Voeg 2 ml van oplossing B aseptisch toe aan oplossing A (1000 ml), bij 47 - 50 °C;
– Meng de oplossing voorzichtig;
– De eind pH dient 5,2 (5,1 - 5,4) bij 25 °C te zijn;
– Giet uit in Petrischalen (15-20 ml in Petrischalen met een diameter van 9 cm);
– Laat het medium stollen en behandel de platen voorzichtig;
– Bewaar de platen, rechtop, bij 5 °C ± 3 °C (in het donker) voor maximaal 2 weken;
– Keer de platen niet om, de agar is hiervoor te slap;
– Indien nodig, droog de platen vlak voor gebruik, bijvoorbeeld door ze rechtop zonder deksel in een Laminar Air Flow kabinet te plaatsen.
– Los de ingrediënten op in het water en breng het mengsel onder voortdurend mengen aan de kook en verhit tot de agar is opgelost (verhit niet te lang!);
– NIET AUTOCLAVEREN;
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na verhitten 7,4 ± 0,2 bij 25 °C bedraagt;
– Koel het mengsel af tot 47-50 °C en giet vervolgens uit in Petrischalen (15-20 ml in Petrischalen met een diameter van 9 cm);
– Laat het medium stollen;
– Bewaar de platen bij 5 °C ± 3 °C voor maximaal 5 dagen;
– Indien nodig, droog de platen voor gebruik.
– Los de ingrediënten op in het water (indien nodig middels verhitten);
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 6,8 ± 0,2 bij 25 °C bedraagt;
– Steriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 121°C in een autoclaaf;
– Laat de oplossing afkoelen tot 47-50 °C.
– Los de ureum op in het water;
– Steriliseer de oplossing d.m.v. filtratie (filter met poriegrootte van 0,22 µm).
– Voeg oplossing B (ureumoplossing) aseptisch toe aan oplossing A (basismedium) 50°C;
– Verdeel het medium over steriele buizen, per buis 10 ml medium;
– Laat de buizen stollen zodat een schuin gedeelte ontstaat.
– Los de ingrediënten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,4 ± 0,2 bij 25°C bedraagt;
– Verdeel het medium over buizen, per buis 10 ml medium;
– Steriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 121°C in een autoclaaf;
– Laat de buizen stollen zodat er bovenop 2, 5 cm agar onderin de buis, een schuin gedeelte ontstaat.
– Los de ingrediënten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 6,8 ± 0,2 bij 25 °C bedraagt;
– Verdeel het medium over smalle reageerbuizen; per buis 5 ml medium;
– Steriliseer gedurende 15 min bij 121°C in een autoclaaf.
– Selectie van een Salmonella verdachte kolonie (vastgesteld middels biochemische typering);
– Onderzoek naar auto-agglutinatie;
– Agglutinatie met O-antisera: voor het aantonen van O-antigenen in het Lipopolysaccharide (LPS) van de bacterie;
– Agglutinatie met H-antisera: voor het aantonen van de H-antigenen in de flagellen van de bacterie.
– Grootte van de druppel op het objectglas (bijv. ‘25 µl’ of ‘een druppel’);
– Wijze van opbrengen van antiserum en bacteriemateriaal op het objectglas (bacteriemateriaal direct vanaf agar of via een suspensie toevoegen aan een druppel antiserum op het objectglas of antiserum toevoegen aan een druppel ‘bacteriesuspensie’, op het objectglas);
– Zwenktijd van het objectglas (kan variëren van 5 sec tot 60 sec);
– Wijze van aflezen van het resultaat (met blote oog, met vergrootglas, tegen een donkere achtergrond, etc.);
– Interpretatie van de resultaten (lees met name de voetnoten m.b.t. de beperkingen) .
– Blanco controle,
– Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze negatieve controle komen te vervallen),
– Positieve controle.
• Gebruiksaanwijzing VIDAS SLM 30 702 test, instructie van de fabrikant.
• Hartman, E.G., Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis (MSRV)-medium, Gezondheidsdienst voor Dieren, projectnr. 401919, september 1999.
• NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Horizontale methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• PVE-SALMONELLA-MSRV-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee.
• Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl PVE-SALMONELLA-SERO-140607. Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl bol
• Van der Zee, H. et al. Validatierapport van de Salmonella bepaling in de matrix dons met behulp van de VIDAS SLM methode. PVE, september 2002.
• Gebruik specifieke, gescheiden sets laboratorium benodigdheden zoals pipetten en buizen voor bijvoorbeeld DNA extractie en de bereiding van PCR mix.
• Het is van groot belang dat gebruik wordt gemaakt van een positieve en negatieve controle in elke serie van amplificatie reacties (‘PCR run’).
• Gebruik geen reagentia waarvan de houdbaarheidsdatum is verstreken.
• Homogeniseer reagentia voorafgaand aan gebruik.
• Controleer regelmatig de nauwkeurigheid en precisie van alle pipetten en apparatuur.
• Verwissel handschoenen met enige regelmaat, vooral indien contaminatie wordt verondersteld.
• Voer periodieke reiniging uit van de werkplaats met tenminste 5% bleekmiddel.
• Vermijdt gebruik van latex handschoenen met poeder. Voorkom vingerafdrukken op het optisch sealing tape.
• Schrijf niet op de dopjes van PCR-buizen. In beide gevallen zal de real-time dataacquisitie hinder ondervinden.
• Een monster wordt negatief beschouwd voor Salmonella indien geen Ct-waarde voor FAM is toegekend, en de interne controle (Texas Red) een Ct-waarde > 10 heeft.
• Indien de interne controle ook geen Ct-waarde is toegekend (Ct = N/A), dan is interpretatie van het resultaat onmogelijk. Een dergelijk resultaat kan een indicatie zijn van remming van de PCR reactie. In dit geval dient het monster (DNA-extract) 1/10 verdund te worden in steriel gedestilleerd water en moet de PCR reactie worden herhaald.
– Blanco controle,
– Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze negatieve controle komen te vervallen),
– Positieve controle.
• AFNOR Validation Certificate, iQ CheckTM Salmonella, attest BRD-07/06-07/04.
• Gebruiksaanwijzing van de iQ CheckTM Salmonella Test. Bio-Rad Laboratories b.v., 30 augustus 2004, Veenendaal, NL.
• Miras l., Hermant N., Arricau N., Popoff M.Y. Nucleotide sequence of lagA and lagB genes involved in invasion of HeLa cells by Salmonella enterica subsp. Enterica ser. Typhy. Research in Microbiology, Vol. 146 (1): 17-20 (1995).
• NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Horizontale methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders – Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• PVE-SALMONELLA-MSRV-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl
• PVE-SALMONELLA-SERO-140607. Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl
• Tyagi, S. and Kramer, F.R. Molecular Beacons: Probes that fluoresce upon hybridization. Nature Biotechnology 14: 303-308 (1996).
– Los de ingrediënten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);
– Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 ± 0,2 bij 25°C bedraagt;
– Verdeel het medium over daarvoor geschikte flessen of potten;
– Steriliseer in een autoclaaf (15 min. 121°C) .
– Blanco controle,
– Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze negatieve controle komen te vervallen),
– Positieve controle.
• Jacobs-Reitsma, W. (1994). Epidemiology of Campylobacter in Poultry. Thesis Agricultural University Wageningen, The Netherlands.
• Jacobs-Reitsma W., M. van der Wal, R. Achterberg and J. Wagenaar. Comparative studies on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation A-12 at the 12th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. of Med. Microbiol., Vol. 293 Suppl. 35, p. 6-7.
• NEN-EN-ISO 10272:1995. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the detection of thermotolerant Campylobacter + technical corrigenda (ISOIO272:1995/Cor.1:1996(E) and ISO 10272:1995/Cor:1997(E). Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders - Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
– Blanco controle,
– Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze negatieve controle komen te vervallen),
– Positieve controle.
• Jacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, E. Samuëls and J. Wagenaar. Evaluation of the VIDAS Campylobacter Assay for detection of Campylobacter in fresh poultry products after various enrichment methods. Posterpresentation A-18 at 12th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. Med. Microbiol., Vol. 293 Suppl. 35, p. 6.
• Jacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, R. Achterberg, J. Wagenaar. Comparative studies on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation A-21 at 12th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. Med. Microbiol., Vol. 293 Suppl. 35, p. 6-7.
• NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders - Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.
• PVE-CAMPYLOBACTER-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van Preston en CCDA in mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl
• Samuëls, E.L.A.M. en W. Jacobs-Reitsma, Validatierapport van de Campylobacter bepaling in de matrix pluimveevlees met behulp van de VIDAS CAM methode. (Onderzoek in het kader van het PVE Plan van Aanpak/Actieplan 2000 + Salmonella en Campylobacter in de pluimveesector), april 2004.